Паразитологическое вскрытие ведут в принятом порядке и определенной последовательности, с тем чтобы тщательно обследовать все органы и ткани рыбы, не упустить каких либо паразитов. При вскрытии рыбы нужно соблюдать аккуратность, следить за тем, чтобы поверхность внутренних органов не была повреждена при выделении из полости тела, так как при небрежном вскрытии и повреждении органов паразиты могут быть утеряны или, попав в другой орган, могут ввести в заблуждение исследователя (Мусселиус и др., 1983).
В паразитологическом исследовании используют компрессионный способ, т.е. исследуемую ткань или орган помещают между двумя стеклами, сдавливают между ними до прозрачности и исследуют в проходящем свете микроскопа или лупы.
Очень важно провести тщательный количественный учёт найденных паразитов, ибо только таким образом можно оценить эпизоотологическую ситуацию и патогенное воздействие паразитов на рыб. Гельминтов и ракообразных учитывают в абсолютных величинах, а простейших принято подсчитывать в 25 полях зрения микроскопа при увеличении 7х10, 7х40 в зависимости от величины паразита и выражать в средней на одно поле зрения микроскопа.
Если количество паразитов так велико, что собрать всех не представляется возможным, то собирают часть их (например, моногеней с одной половины жаберных дуг). Собранных паразитов отмывают в чистой воде и в дальнейшем изготовляют окрашенные препараты, по которым определяют видовую принадлежность. Для каждой группы паразитов существуют специфические способы фиксации и окраски, описанные в соответствующих лабораторных работах (Методы санитарно-эпидемиологической экспертизы…, 2001).
Порядок проведения работы следующий.
1. Осмотр, внешнее обследование рыбы. Для обследования берут живую или только что уснувшую рыбу, обездвиживают ее и осматривают. Прежде всего обращают внимание на окраску, форму тела, наличие на нем повреждений, опухолей, черных пятен, язв, белого налета на коже и жабрах, а также крупных паразитов – рачков, пиявок и др. После внешнего осмотра делают скальпелем соскоб с поверхности тела. Собранную слизь помещают в каплю воды на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и рассматривают сначала под малым, а затем под большим увеличением микроскопа. Здесь могут быть обнаружены простейшие: хилодонеллы, ихтиофтириусы, апиозомы, триходины, миксоспоридии, моногенеи. После взятия соскоба рыбу следует быстро (чтобы не слишком подсушить) взвесить и измерить. Обычно определяют длину тела рыбы от переднего конца головы до конца чешуйчатого покрова, т.е. промысловую длину (l) и до конца хвостового плавника, т.е. зоологическую длину (L). Позднее, пользуясь этими данными определяют темп роста и коэффициент упитанности по формуле
K=P*100/l3,
где K– коэффициент упитанности, Р – масса рыбы, г; l – длина тела до конца чешуйчатого покрова, см.
2. Вскрытие полости тела и обследование внутренних органов. Вскрытие делают очень осторожно, чтобы не повредить внутренних органов.
Рыбу вскрывают на лабораторном стекле. При внимательном осмотре полости тела и внутренних органов могут быть обнаружены свободно лежащие или в капсулах личинки цестод, нематод, скребней, видимые невооруженным глазом.
Затем извлекают внутренние органы, осматривают плавательный пузырь, сердце и сердечную полость. Далее отпрепаровывают комплекс органов пищеварительной системы. Исследуют пищеварительный тракт, отыскивая личинок в капсулах на его поверхности или просвечивающих через серозные покровы (Diphyllobothriumdendriticum, Diphyllobothriumlatum, Dioctophymerenale, Eustrongylidesexicisus, Corynosomastrumosum, Corynosomasemerse, Bolbosomacaenoforme, личинки сем. Anisakidae).
Специальные методы исследования на выявление возбуделей вертежа (Myxosomacerebralis), CeratomyxaShasta и возбудитель пролиферативной болезни почек (PKD) выбираются в зависимости от целей паразитологического контроля (вида паразита) (Мусселиус и др., 1983).
Количественные показатели паразитарной инвазии вычисляются следующим образом:
1.экстенсивность инвазии – доля зараженных рыб в выборке (%);
2.интенсивность – количество паразитов в одной зараженной рыбе (экз.);
3.средняя интенсивность инвазии – среднее число особей паразита на одну зараженную рыбу в выборке;
4. доверительный интервал – амплитуда возможных значений фактической зараженности рыбы паразитами в популяции вида рыб в зависимости от объёма исследованной выборки (%, д.и.);
5. пределы интенсивности – величина минимальной и максимальной интенсивности среди зараженных рыб в выборке (экз.);
индекс обилия – среднее число паразитов на каждую обследованную рыбу в выборке (Уильямсон, 1975).Глава 3. Результаты собственных исследований и их обсуждение
При паразитологическом обследовании молоди рыб из р. Большая проводили анализ паразитофауны кеты, нерки, кижуча, горбуши, гольца, чавычи.
Все найденные паразиты относятся к типичной фауне молоди лососей в пресноводный период жизни. Скатившись в море, лосось утрачивает почти всех своих пресноводных паразитов (Бауэр и др., 1977).
По итогам проведенных исследований было определено 17 видов паразитических организмов, в основном это были паразиты наружных покровов (эктопаразиты). Их выделили девять видов: простейшие Ichtiobodonecator, Apiosomaconicum, Trichodinatruttae и T.nigra, Epistilissp., Chilodonellapiscicola, Cryptobiabranchialis, моногенеи Tetraonchusalaskensis, Gyrodactilusbirmani. К эндопаразитам, кроме одного вида простейших Myxobolusarcticus, относятся три вида нематод Sterliadochonaephemeridarum, Philonemaoncorynchi, Contracaecumsp., два вида цестод Cyathocephalustruncatus, Eubothriumsalvelini, одна трематода Crepidostomumfarionis и скребень Neochinorhynchusrutili.
Всего было выявлено 8 видов простейших паразитов, только один из которых относится к эндопаразитам Myxobolusarcticus.
Эктопаразит Trichodinatruttae встречается во всех проведенных выборках, у гольцов был самый высокий показатель из обследованных рыб 40.0% (д.и. 13.0–70.9%). Причиной этого, скорее всего, является более продолжительный период, проведенный гольцами в пресной воде. Среди тихоокеанских лососей самый высокий показатель экстенсивности у молоди чавычи в 2003 г. – 33.3% (д.и. 17.6 – 51.3%), самый низкий – у сеголеток горбуши – 3.33%(0.0–12.8%).
Паразитами, часто встречающимися у обследованных мальков, оказались Trichodinatruttae, которая определена у всех шести видов и Ichtiobodonecator у трех (кижуча, горбуши и кеты). Экстенсивность заражения Ichtiobodonecatorнезначительная по двум годам и составляет от 3.33% (д.и. 0.0–12.8%) до максимальной у сеголеток кижуча в 2003 г. 6.67% (д.и. 0.0 – 24.6%). Другой вид триходин T. nigra был обнаружен у трех видов: у нерки и чавычи в 2004 г., у кижуча в 2003, 2004 гг. При этом самый высокий показатель экстенсивности стоит отметить у кижуча 40.0% (д.и. 23.2–58.2%).
Поражение инфузорией Epistylissp. отмечалось незначительное – всего 3.33% (д.и. 0.0 – 12.8%) и обнаружено у сеголеток кижуча и чавычи. Другая инфузория Chilodonellapiscicola была выявлена у сеголеток чавычи с низким показателем экстенсивности – всего 6.67% (д.и. 0.6–18.4%), такая же экстенсивность была у Cryptobiabranchialis (6.67% (д.и. 0.0–24.6%)).
Myxobolusarcticus, поражающий мозг рыбы, является только тканевым паразитом и поражает только молодь до окостенения тканей черепа. Миксоспоридия M. arcticus была обнаружена только у двух видов, а именно чавычи и нерки в 2004 г. Стоит отметить низкий показатель экстенсивности: от 9.09% (д.и. 0.9–24.6%) до10.53% (д.и. 1.0–28.2%).
Обилием простейших паразитов в окружающей среде можно объяснить попадание их на оболочку икры в водоеме, а затем заражение мальков.
Среди обнаруженных паразитов пять видов (C.branchialis, C.piscicola, I.necator, T.truttae и A.conicum) относятся к группе патогенных и могут вызывать паразитозы. Для молоди они опасны тем, что разрушают поверхностный слой эпителия и вызывают кожную и жаберную эпителиальную гиперплазию, а у тяжело инвазированных рыб деструкцию клеток и сильное слизеотделение. Вследствие этого происходит нарушение жаберного и кожного дыхания (Бауер, 1963; Банина, Чернышова, 1977; Карманова, 1998). Эти виды простейших паразитов могут проникать на рыбоводные заводы с водой, поступающей из водоемов, и при искусственном выращивания лососей способны увеличивать свою численность и становиться причиной энзоотий (Бауер, 1987). Присутствие простейших паразитов на заводах может быть связанно с заносом их от производителей, особенно в отсутствие антипаразитарной обработки рыб, используемых для оплодотворения. Проникновение паразитов на заводы может происходить и тогда, когда набухание икры после оплодотворения проводится непосредственно в речной или озерной воде, причем, в диапазоне температуры воды, содержащим оптимальную для жизнедеятельности и развития простейших.
Так, в 2000 г., когда проводилось искусственное оплодотворение икры, отмечена температура воды в местах ее набухания – от 5,2 до 7˚С (данные по заводам), а оптимальная температура для размножения данного паразита в водоемах Камчатки 5–6,5˚С (Линева, 2000). В воде паразиты попадают на наружную оболочку икры, имея возможность паразитировать на ней. При снижении температуры образуют покоящиеся цисты, а при повышении восстанавливают свою жизнедеятельность и нападают на личинок и мальков.
С целью предупреждения заноса возбудителя болезни в прудовых хозяйствах на водоподающих каналах устанавливают сорорыбоуловители из металлической сетки, предохраняющие от захода сорной и дикой рыбы.
Практическое значение проведенных исследований состоит в том, чтобы изучить видовой состав паразитов молоди в естественных водоемах, условия заражения инвазионными болезнями. Получив такого рода информацию, на ЛРЗ разрабатываются меры профилактики, для предотвращения распространения паразитозов в искусственных условиях и массовой гибели молоди или привести к снижению устойчивости организма при скате в море.
В основном видовой состав паразитов представлен эктопаразитами, а именно простейшими и моногенеями, Заслуживает внимания довольно высокая экстенсивность Apiosomaconicum, которая варьирует от 6.67% (д.и. 0.6–18.4%) у нерки в 2003 г. до 90.0% (д.и. 64.5–100.0%) у годовиков гольца.