На правах рукописи
Сметанин Владимир Анатольевич
ВЛИЯНИЕ АЛКОГОЛЬНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ НА АКТИВНОСТЬ ОСНОВНЫХ КАРБОКСИПЕПТИДАЗ В ТКАНЯХ САМОК КРЫС НА РАЗНЫХ СТАДИЯХ ЭСТРАЛЬНОГО ЦИКЛА
03.00.04 – Биохимия
Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Научный руководитель доктор биологических наук профессор Генгин М.Т.
ПЕНЗА 2004
СОДЕРЖАНИЕ
1.4. Карбоксипептидаза Н………………………………………………...........32
1.5. ФМСФ-ингибируемая карбоксипептидаза…………………………..……35
1.6. Карбоксипептидаза М…………………………………………….…...........37
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ………………..…39
2.1. Материалы исследования…………………………………………..............39
Методы исследования……………………………………………………………......40
2.2.1. Метод определения активности карбоксипептидазы Н и карбоксипептидазы М……………………………………………………............40
2.2.2. Метод определения активности ФМСФ-ингибируемой карбоксипептидазы…………………………………………………………..…..41
2.2.3. Статистическая обработка результатов исследования………………….…42
2.3. Схема эксперимента………………………………………………………....43
АКТГ – адренокортикотропный гормон
АПМЯК – аминопропилмеркаптоянтарная кислота
АПФ – ангиотензинпревращающий фермент
ГГГС – гипоталамо-гипофизарно-гонадная система
ГГНГС – гипоталамо-гипофизарно-надпочечниково-гонадная система
ГГНС – гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковая система
ГРФ – гонадотропин-рилизинг-фактор
ГПЯК – гуанидинопропилянтарная кислота
ГЭМЯК – гуанидиноэтилмеркаптоянтарная кислота
ДСИП – дельта-сон-индуцирующий пептид
КПА – карбоксипептидаза А
КПВ – карбоксипептидаза В
КПН – карбоксипептидаза Н
КПM – карбоксипептидаза M
КПN – карбоксипептидаза N
ЛГ – лютеинизирующий гормон
ЛКПА – лизосомальная карбоксипептидаза А
ЛКПВ – лизосомальная карбоксипептидаза В
ПОМК – проопиомеланокортин
ПХМБ – п-хлормеркурийбензоат
ПХМФС - п-хлормеркурийфенилсульфонат
ФМСФ – фенилметилсульфонилфторид
ФМСФ-КП – фенилметилсульфонилфторид-ингибируемая
карбоксипептидаза
ФСГ – фолликулостимулирующий гормон
ЭПР – эндоплазматический ретикулум
ЭДТА – этилендиаминтетраацетат натрия
Проблема алкоголизма, особенно женского, является крайне актуальной для человечества, как с социальной, так и с медицинской точки зрения. Клинические наблюдения указывают на то, что под действием этанола в организме женщины возникают существенные изменения в эндокринной системе, что сопровождается нарушениями половой функции [2, 81].
При алкоголизме существенно меняется уровень целого ряда нейропептидов, многие из которых играют существенную роль в этиологии и патогенезе данного заболевания [19, 61, 74, 88]. Изменение уровня биологически активных пептидов при алкогольной интоксикации во многом определяется ферментами их обмена, к которым, в частности, относятся карбоксипептидаза Н, фенилметилсульфонилфторид-ингибируемая кар-боксипептидаза и карбоксипептидаза М – основные карбоксипептидазы, катализирующие отщепление остатков аргинина и лизина с С-конца пептидов [28, 41, 144, 212].
Интерес к этим ферментам вызван тем, что они участвуют в процессинге, модуляции и инактивации биологически активных пептидов [28, 41, 144]. В связи с тем, что нейропептиды выполняют функции нейромедиаторов, нейромодуляторов и гормонов, они участвуют в регуляции практически всех функций организма, в том числе и в регуляции функционирования полового цикла [11, 72], а также вовлекаются в развитие многих патологических состояний, среди которых для современной биологии и медицины особую значимость представляет алкоголизм [19, 74, 88]. Прогресс в изучении природы этого заболевания неотделим от понимания нейробиологических процессов, лежащих в его основе [80]. В этой связи представляется очень важным исследование активности основных карбоксипептидаз при острой алкогольной интоксикации. Чем глубже будут наши представления об энзимопатологии, о роли протеолитических ферментов в гомеостазе, тем более целенаправленным будет поиск лекарственных средств для лечения алкоголизма среди регуляторов активности ферментов.
Одним из важных аспектов проблемы алкоголизма является исследование нарушений, происходящих в организме женских особей при алкогольной интоксикации. Однако при этом необходим учет особенностей женского организма, связанных с наличием полового цикла, который сопровождается комплексом физиологических, биохимических и других изменений, происходящих во всем организме. В ходе эстрального цикла наблюдаются значительные изменения в функционировании пептидэргических систем [11], что, несомненно, связано с изменением активности ферментов участвующих в обмене биологически активных пептидов [28, 41] и в свою очередь, вероятно, определяет особенности ответной реакции женского организма на острую алкогольную интоксикацию на разных стадиях эстрального цикла [101, 164].
Кроме того, известно, что некоторые аспекты проявления острой алкогольной интоксикации определяются в значительной степени полом. Предполагают, что это связано с различиями в гормональном статусе самцов и самок [44]. Различный уровень нейропептидов, определяемый активностью ферментов их обмена, у особей разного пола приводит к появлению отличий в количестве потребляемого этанола, в скорости развития зависимости, а также появлению различий в течение алкогольной интоксикации у особей противоположного пола [5, 19, 64, 65].