В опытах использовал экстракт элеутерококка жидкий (ExtractumEleutherococcifluidum) на 40% спирте из корневища с корнями. Жидкость тёмно-коричневого цвета, слегка жгуче-горьковатого вкуса, своеобразного запаха. Смешивается во всех соотношениях с водой.
Вышеперечисленные препараты фабричного изготовления применял в качестве подкормки пчёлам в смеси с сахарным сиропом для повышения иммунитета организма медоносных пчёл, сопротивляемости к заболеваниям, увеличения сохранности и продуктивности пчелосемей.
Для определения повышения иммунитета пчёл под действием дикорастущих растений была использована методика простой диффузии в агаре (Гузеева Л.Н., 1982), которая основана на способности секретов желез кишечника пчелы растворять взвешенный в агаре ацетоновый порошок (М. lysodeikticus).
Методика определения активности антибиотических веществ подглоточной, грудной, средней и задней желез заключалась в следующем: пчёл омертвлял. Головку пчелы отделял, а пищевод отсекал раскаленной над пламенем спиртовки препаровальной иглой. При этом содержимое зобика надёжно герметизируется.
Головки в количестве 10 штук растирал в ступке со стерильным кварцевым песком. К полученной смеси добавлял 1 мл стерильного физиологического раствора, экстракт центрифугировал при 800 об/мин в течение 30 минут. Надосадочную жидкость использовал в реакции.
В стерильные чашки Петри наливал по 25 мл мясопептонного агара наносил 1 мл взвеси микробной культуры на физиологическом растворе, содержащей 2 млрд. микробных клеток. Использовал 2-суточную культуру бактерий М. lysodeikticus. Посредством покачивания чашки, суспензию равномерно распределял по поверхности среды с последующим удалением избытка жидкости пипеткой. После 30 минутного подсушивания при комнатной температуре, в агаре пробойником пробивал 5 лунок диаметром 6 мм. Лунки заполнял экстрактами исследуемых тканей. Каждый экстракт испытывал на антибиотическую активность. Контролем служил стерильный физиологический раствор.
Результаты реакции учитывал по задержке микробного роста вокруг лунок после 48 – часового инкубирования в термостате при 320С.
В опытной чашке измерял диаметр зон задержки роста микрококка, образующихся вокруг лунок с исследуемым материалом, в контрольной чашке учитывал рост микрококка и зоны задержки роста вокруг лунок с физиологическим раствором. Полученные величины складывал и выводил средние арифметические отдельно для каждого препарата.
Согласно рекомендациям «Унификация методов определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам», утверждённых Минздравом СССР 13 марта 1975 г., считали, что задержка роста микроба до 10 мм свидетельствует о низкой чувствительности его к препарату, слабой бактерицидности вещества; зону задержки микробного роста более 10 мм расценивали как наличие чувствительности микроорганизма, как выраженную бактерицидность исследуемого вещества.
Полную задержку роста вокруг лунки с препаратом рассматривал как бактерицидное действие (как антибиотическую активность секретов желез кишечника).
Пчёлы обладают сопротивляемостью, которая обеспечивается в первую очередь антибиотическими веществами желез кишечника. Железы кишечника – антибиотические вещества. Эти вещества являются обязательными компонентами свежесобранного нектара или сахарного сиропа, что предохраняет незрелый жидкий мёд от брожения. Зрелый мёд не содержит антибиотических веществ и сохраняется за счёт высокой концентрации сахаров и кислот.
Подглоточной железы лишены личинки пчёл и трутни, а у маток она недоразвита. Антибиотические вещества подглоточной и грудной желез попадают в корм личинок старшего возраста, а в свежесобранном нектаре в период взятка количество их значительно увеличивается, поскольку первые порции антибиотических веществ вносят пчёлы-сборщики. Эти же вещества в меньшей мере с секретом подглоточной железы и в большей мере с секретом грудной – поступают вместе с кормом в медовый зобик, а затем в средний и задний отделы кишечника рабочей пчелы, где участвуют в регулировании кишечной микрофлоры. По мере продвижения пищевых масс по кишечнику активность антибиотических веществ снижается.
Средняя кишка является своеобразной фабрикой ферментов, участвующих в пищеварительных процессах. Из медового зобика вместе с пищей в среднюю кишку попадают некоторое количество инвертазы, амилазы, каталазы, протеазы и антибиотических веществ.
Обще физиологические факторы иммунитета являют собой вторую линию обороны организма пчёл. Именно эти факторы играют основную роль при самооздоровлении пчелосемей.
Были проведены опыты по отработке доз препаратов растительного происхождения на организм пчелы и пчелосемью в целом.
Изучали стимулирующее действие лимонника китайского и элеутерококка на антибиотическую активность секретов желез кишечника, на производственные и биологические показатели пчелосемей весной (апрель), после выставки пчёл из зимовника и осенью (август), используя препараты фабричного изготовления в дозах 3, 5 и 7 мл на 1 литр 50%-ного сахарного сиропа. Скармливал пчёлам из специальных пластмассовых кормушек в течение 10 дней и по мере поедания постоянно подливал.
Для чего было создано 2 группы здоровых пчелосемей, по 10 пчелосемей в каждой (9-опытных и 1-контрольная). Пчелосемьи подбирали по принципу аналогов: средних по силе, не менее 5–6 рамок. Контрольной группе пчёл скармливали 50%-ный сахарный сироп с добавлением этилового спирта в дозе 7 мл. Через 10 суток после дачи препаратов, от каждой пчелосемьи опытных и контрольных групп отбирали пробы пчел (по 10 штук) для дальнейшего исследования.
К производственным показателям у пчел относят валовый выход меда и воска, дневной принос нектара.
Продуктивность по мёду учитывали путем взвешивания откаченного мёда от семей подопытных и контрольных групп, а по воску – путем учета количества отстроенных рамок искусственной вощины каждой семьёй.
Дневной принос нектара на протяжении одного сезона учитывали в каждой группе путем постановки сильной семьи на контрольные весы.
К биологическим показателям у пчёл относят средний вес рождающихся пчел, продолжительность жизни пчёл, продолжительность рабочего дня, интенсивность вылета пчел в одну минуту, силу семьи, количество печатного расплода в ячейках.
Вес рождающихся пчел изучал путем индивидуального взвешивания их на торзионных весах во время выхода молодых пчел из ячеек. Продолжительность жизни пчел определял путем мечения краской определенного количества молодых пчел во время выхода их из ячеек, количество печатного расплода в ячейках – путем обмера расплода рамкой-сеткой.
Силу пчелосемей устанавливали визуально путем просмотра через каждые 2–3 дня, продолжительность рабочего дня определяли путем ежедневного просмотра пчелосемей.
Результаты исследования сравнивали с контрольными группами пчел, обработаны статистически и вынесены в таблицы.
Биостимулирующую роль настоек на организм пчёл оценивал по выходу продукции пчеловодства (воск, мёд), по биологическим показателям (сила пчелосемей, печатный расплод, яйценоскость маток, вес пчёл), а также сохранности в зимний период.
4.2 Изменение некоторых показателей естественной резистентности пчел под действием лимонника китайского
Биостимулирующую роль настойки лимонника китайского на организм пчёл оценивал по антибиотической активности желез кишечника (подглоточной, грудной, средней и задней). Результаты исследования отражены в (табл. 2), в зависимости от времени года.
Из таблицы 2 видно, что настойка лимонника китайского оказывает существенное влияние на антибиотическую активность желез кишечника пчелы во всех испытуемых дозах как весной, так и осенью. Иммуностимуляция выражается в росте диаметра зоны лизиса тест культуры М. lysodeikticus. Стимуляция естественной резистентности отражается практически на всех секретах желез кишечника пчёл с высокой степенью статистической достоверности (Р < 0,001).
Применение настойки лимонника китайского в качестве подкормки с сахарным сиропом пчелам весной и осенью способствовало усилению активности желез кишечника, так использование препарата в дозе 3 мл увеличивало зону лизиса тест культуры М. lysodeikticusсекретом подглоточной железы весной до 16 мм, осенью 17 мм, разница с контролем превышала 6 мм; грудной железы – весной 19 мм, осенью 20 мм разница с контролем достигла 2 мм. Под действием препарата усиливалась активность средней железы, весной она составил 17 мм, осенью 19 мм разница с контролем более 5 мм. Активность секрета задней железы составила весной 22 мм, осенью 23 мм, разница с контролем более 7 мм.
Таблица 2 – Антибиотическая активность желез кишечника пчелы после стимуляции лимонником китайским весной и осенью (М+m)
| Номергруппы | Препарат | Доза вмл | Лизис тест культуры в мм | |||
| ВЕСНА | ||||||
| Железы кишечника пчелы | ||||||
| подглоточная | грудная | средняя | задняя | |||
| 1 | Настойка лимонника | 3 | 16+0,7* | 19+0,5*** | 17+0,3* | 22+0,4* |
| 2 | То же | 5 | 16+0,4* | 21+0,4* | 20+0,5* | 24+0,4* |
| 3 | То же | 7 | 21+0,3* | 23+0,4* | 23+0,4* | 26+0,6* |
| 4 Контроль | 7 | 10+0,4 | 17+0,4 | 12+0,4 | 15+0,1 | |
| Номергруппы | Препарат | Доза вмл | Лизис тест культуры в мм | |||
| ОСЕНЬ | ||||||
| Железы кишечника пчелы | ||||||
| подглоточная | грудная | средняя | задняя | |||
| 1 | Настойка лимонника | 3 | 17+0,3* | 20+0,6*** | 19+0,4* | 23+0,3* |
| 2 | То же | 5 | 20+0,2* | 22+0,3* | 22+0,6* | 25+0,6* |
| 3 | То же | 7 | 23+0,4* | 25+0,5* | 24+0,4* | 28+0,5* |
| 4 Контроль | 7 | 12+0,5 | 18+0,6 | 14+0,2 | 16+0,2 | |
Применение настойки лимонника китайского в дозе 5 мл весной способствовало возрастанию антибиотической активности секрета подглоточной железы, что выражалось в росте зоны лизиса тест культуры 19 мм, осенью 20 мм разница с контролем превысила 8 мм, грудной железы – весной 21 мм, осенью 22 мм разница с контролем составила более 3 мм. Под действием препарата в указанной дозе усиливалась активность секрета средней железы весной до 20 мм, осенью 22 мм в сравнении с контролем, задней железы составила весной 24 мм, осенью 25 мм разность с контролем превысила 9 мм.