Допускается вместо среды Крумвиде-Олькеницкого в модификации Ковальчука посев на углеводные среды в короткий пестрый ряд, включая среды с глюкозой, лактозой, сахарозой, маннитом, и мальтозой, полужидкий агар уколом (для определения подвижности) и бульон Хоттингера для определения образования индола и сероводорода.
Для дальнейшей идентификации бактерий готовили мазки, которые окрашивали по Граму, микроскопировали и изучали серологические свойства микроорганизмов путем постановки пробной агглютинации на предметном стекле с агглютинирующей адсорбированной поливалентной сальмонеллезной О-сывороткой. При получении положительной реакции на стекле с поливалентной сывороткой проводили идентификацию с помощью монорецепторных агглютинирующих О-сывороток.
Установив серологическую группу, к которой относятся исследуемые бактерии, с помощью Н-сывороток определяли тип бактерий.
Обнаружение подвижных (кроме S. Pullorum & S. Gallinarum) грамотрицательных палочек, дающих характерный рост на элективных средах, неферментирующих лактозу и сахарозу, ферментирующих глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа ( S.typhi suis не ферментирует маннит), дающих положительную реакцию агглютинации с монорецепторными О- и Н-сальмонеллезными сыворотками, указывает на наличие бактерий из рода сальмонелл.
Определение бактерий группы протея. Сущность метода заключается в определении морфологии и роста на питательных средах, способности гидролизировать мочевину и образовывать сероводород.
Для подтверждения наличия роста протея в Н-форме 0,5 куб.см анализируемой взвеси вносили в конденсационную воду свежескошенного мясопептонного агара, разлитого в широкие пробирки, не касаясь среды (метод Шукевича). Вертикально поставленные пробирки помещали в термостат с температурой
37° С. Через 18-24 ч посевы просматривали. Обращали внимание на образование ползучего вуалеобразного налета с голубым оттенком; на скошенном мясопептонном агаре культура поднимается из конденсационной жидкости вверх по поверхности среды. При появлении характерного роста микробов рода протея, микроскопировали окрашенные по Граму мазки и изучали подвижность микробов в раздавленной или висячей капле.
Для обнаружения нероящихся О-форм можно проводить посев на поверхность агара Плоскирева. О-форма протея растет на этой среде в виде прозрачных колоний, слегка подщелачивающих среду, окрашивая ее в желтый цвет. Делали пересев материала из подозрительных колоний в среду Крумвиде-Олькеницкого в модификации Ковальчука, где при наличии бактерий из группы протея среда окрашивается в ярко-красный цвет (вследствие расщепления мочевины) и может образовываться черный осадок с возможным разрывом агарового столбика (вследствие образования сероводорода).
Обнаружение полиморфных грамотрицательных палочек, образующих характерный рост на средах в Н-форме (подвижные) и О-форме (неподвижные), ферментирующих глюкозу и мочевину, неферментирующих лактозу и маннит, указывает на наличие бактерий из рода протея.
Определение коагулазоположительных стафилококков. Сущность метода заключается в определении морфологии, характера роста на питательных средах и в способности отдельных стафилококков ферментировать лецитиназу и коагулировать цитратную плазму крови кролика под воздействием фермента коагулазы.
Из разведения анализируемой взвеси продукта (1/10) проводили посевы на молочно-солевой агар, содержащий 6,5% хлористого натрия, для выявления пигмента или желточно-солевой агар, содержащий 6,5% хлористого натрия, для выявления лецитиназной активности.
Взвесь наносили на поверхность агара в количестве 0,2 куб.см и равномерно растирали по всей поверхности агаровой среды.
Посевы термостатировали в течение 24 ч при температуре 37° С и 24 ч выдерживали при комнатной температуре.
На поверхности питательной среды колонии стафилококка имеют вид плоских или слегка выпуклых блестящих колоний с ровным краем. При этом на молочно-солевом агаре лучше выявляется пигмент (эмалево-белый или золотистый), а на желточно-солевом агаре колонии стафилококков могут образовывать «радужный венчик», что является одним из признаков их патогенности.
Из подозрительных колоний готовили препараты, которые окрашивали по Граму. При наличии стафилококков в препарате обнаруживаются грамположительные мелкие кокки, располагающиеся неправильными гроздьями.
Для подтверждения признаков патогенности стафилококков ставили реакцию плазмокоагуляции. В прибор с 0,5 куб.см цитратной плазмы крови кролика, разведенной физиологическим раствором в соотношении ¼ , вносили петлю чистой суточной культуры стафилококка и ставили в термостат при температуре 37°С. Реакцию плазмокоагуляции учитывали через 3-4 ч (не встряхивая пробирку) и оставляли в термостате на сутки для окончательного учета через 24 ч.
Для постановки реакции плазмокоагуляции можно использовать также сухую цитратную плазму крови кролика.
Реакцию считают положительной, если плазма коагулируется в сгусток.
Для определения количества стафилококков учитывали колонии стафилококков, давшие положительную реакцию плазмокоагуляции. При расчете на 1 г продукта количество подсчитанных колоний умножают на степень разведения и делят на количество посевного материала.
Определение клостридий перфрингенс(сульфит-восстановителей). Сущность метода заключается в специфическом росте клостридий перфрингенс в средах СЦС или Вильсон-Блера, на которых в результате восстановления сернистокислого натрия в сернокислый натрий происходит взаимодействие с хлористым железом и образуется почернение среды за счет сернистого железа.
Проведение анализа на среде Вильсон-Блера. В пробирки, содержащие по 9 куб.см расплавленной и охлажденной до температуры 45° С среды Вильсон-Блера, вносили стерильной пипеткой по 1 куб.см десятикратных разведений (от 1/10 до 1/1000000) взвеси испытуемого продукта. Посевной материал и среду тщательно перемешивали. Посевы поместили в термостат с температурой 46° С на 8-12 ч. Появление в среде черных колоний или почернение всей среды указывает на присутствие сульфит-редуцирующих клостридий.
За положительный титр клостридий (сульфит-восстановителей) принимают то максимальное разведение суспензий, в посеве которого произошло почернение среды.
2.3 Изучение основных свойств добавок.
Для проведения исследования основных свойств добавок нами были отобраны в стерильные чашки Петри из герметичной упаковки следующие добавки: Аромарос «Премикс – 2», «Fest food», «Тари К – 20» и «Полифан».
В целях обеспечения объективности исследований данным добавкам были присвоены следующие номера:
№1 – Аромарос «Премикс – 2»;
№3 – «Fest food»;
№5 – Тари К – 20;
№7 – «Полифан».
В асептических условиях для проведения исследований мы отобрали добавки в следующих количествах:
№1 – 140 г;
№3 – 600 г;
№5 – 500 г;
№7 – 60 г.
Для проведения микробиологических исследований мы приготовили последовательные разведения порошка добавок (1:10, 1:100, 1:1000), которые затем посеяли на МПА и агар Эндо. Подобные исследования мы проводили трижды. Результаты микробиологического исследования порошков добавок приведены в таблицах 2, 3 и 4.
Учет результатов посева добавок от 24.03 98.
Таблица №2.
| Образец № | МАФАнМ |
| 1 | 5,5 х 10 |
| 3 | 1,3 х 10 |
| 5 | 9,1 х 10 |
| 7 | 2,7 х 10 |
| Учет результатов посева добавок от 31.03.98. Таблица №3. | |
| Образец № | МАФАнМ |
| 1 | 5,4 х 10 |
| 3 | 1,8 х 10 |
| 5 | 8,1 х 10 |
| 7 | 2,7 х 10 |
Учет результатов посева добавок от 7.04.98.
Таблица №4.
| Образец № | МАФАнМ | |||
| 1 | 5,5 х 10 | |||
| 3 | 1,5 х 10 | |||
| 5 | 8,6 х 10 | |||
| 7 | 1,9 х 10 | |||
| Примечание: рост микроорганизмов на среде Эндо не обнаружен. По данным таблиц 2, 3, 4, наименьшее количество микробных клеток содержится в добавке №1 ( 5,4 х 10), а наибольшее – в добавке №5 (8,6 х 10); кроме того, в образце №3 были обнаружены колонии плесеней (9 х 10). 2.4. Изучение микробиологических показателей колбасного фарша при использовании исследуемых добавок. | ||||
С целью изучения влияния добавок на микробиологическую обсемененность колбасного фарша мы отобрали пробы фарша после куттерования (во время которого добавки вносили в фарш) в стерильные чашки Петри. В лаборатории мы приготовили последовательные разведения фарша ( 1:10, 1:100, 1:1000) согласно п.2.2.3. и провели посев на МПА и среду Эндо.
Результаты посева фарша приведены в таблице 5, из данных которой следует, что наименьшую микробную обсемененность имеет фарш №5 (7,3 х 10 ), а наибольшую – фарш №3 (1,3 х 10 ). На среде Эндо рост микроорганизмов не выявлен.
Учет результатов посева фарша от 11.03.98.
Таблица 5.
| Фарш № | МАФАнМ |
| 1 | 5,7 х 10 |
| 3 | 1,3 х 10 |
| 5 | 7,3х10 |
| 7 | 1,1 х 10 |
2.5. Изучение органолептических показателей вареных колбас
при использовании исследуемых добавок.
Опытные образцы вареных колбас при использовании исследуемых добавок были изготовлены на МПП « Коломенское ». После завершения всех операций технологического процесса сначала на МПП, а затем на кафедре химии пищи и биотехнологии МГУПБ провели дегустацию и органолептическую оценку колбасных изделий согласно п.2.2.1.
Результаты органолептического исследования приведены в таблице 6.
Таблица 6.
| Образцы | Внеш- ний вид | Консис-тенция | Вкус | Запах | Цвет | Общая оценка |
| Конт-роль | 4,7 | 4,6 | 4,7 | 4,3 | 4,4 | 4,4 |
| 1 | 4,7 | 4,8 | 4,8 | 4,7 | 4,9 | 4,7 |
| 3 | 4,7 | 4,2 | 4,3 | 4,.1 | 4,7 | 4,3 |
| 5 | 4,7 | 4,7 | 4,7 | 4,4 | 4,6 | 4,6 |
| 7 | 4,7 | 4,6 | 4,3 | 4,0 | 4,3 | 4,3 |
Согласно данным таблицы 6, наилучший результат в оценке органолептических показателей получили образцы колбасных изделий с добавками №1 и №5 (4,7 и 4,6), несколько ниже показатели по сравнению с контрольным образцом у колбас с добавками №3 и №7 (4,3).