в) Исследование активности карбоксипептидазы Н при внутрибрюшинном введении этанола в тканях самок крыс
На стадии диэструса в гипофизе через 4 часа после введения этанола в дозе 1 г на кг веса наблюдалось снижение активности КПН на 33% по сравнению с контрольной группой животных. В гипоталамусе, надпочечниках и яичниках через тот же промежуток времени активность фермента была выше, чем у контрольной группы животных на 33%, 47% и 112% соответственно. В гипоталамусе через 0,5 часа после инъекции раствора этанола активность КПН была выше на 37% по сравнению с контрольными самками (рис.1). Наши данные согласуются со сведениями об усилении образования и секреции энкефалинов, АКТГ, β-эндорфина при острой алкогольной интоксикации [94, 158, 241], в биосинтезе которых принимает участие КПН [27, 28, 29].
Этанол в дозе 4 г/кг в диэструсе измененял активность фермента в гипофизе: через 0,5 и 18 часов она была выше контрольных значений на 43% и 140% соответственно, а через 4 часа – ниже на 57%. В гипоталамусе через 0,5 и 4 часа после введения этанола активность КПН была выше на 26% и 38% соответственно, а через 18 часов – ниже на 31% по сравнению с контрольной группой животных. Снижение активности фермента, возможно, направлено на нормализацию пептидэргических систем. В яичниках только через 0,5 часа после инъекции этанола в дозе 4г/кг активность фермента была выше таковой по сравнению с контролем в 3,6 раза. Увеличение активности КПН при острой алкогольной интоксикации согласуется с представлением об активации многих пептидэргических систем при острой алкогольной интоксикации [19, 86].
Интересно отметить, что в стриатуме на стадии диэструса этанол не оказывал влияния на активность КПН, что, вероятно, может объясняться особенностями биохимического и физиологического статуса животных на разных стадиях эстрального цикла [17, 45, 247].
Достоверные отличия в активности КПН в стадии диэструса при введении различных доз этанола обнаружены в гипофизе и гипоталамусе через 18 часов, а также в яичниках через 0,5 часа после инъекции. При этом этанол в дозе 1г/кг не вызывал изменений в активности фермента, однако при введении этанола в дозе 4 г/кг активность КПН возрастала в 2 раза в гипофизе, в 2,8 раза в яичниках и уменьшалась в гипоталамусе на 23%.
Таким образом, введение этилового спирта на стадии диэструса вызывает разнонаправленные изменения активности КПН. Кроме того, через 18 часов после инъекции этанола в дозе 1 г/кг активность фермента оставалась на прежнем уровне во всех рассмотренных отделах.
Для более полного понимания характера выявленных изменений активности фермента первичный экспериментальный материал был подвергнут дисперсионному анализу влияния времени после инъекции при введении различных доз этанола (табл.2).
Дисперсионный анализ показал отсутствие влияния времени на активность КПН при введении физиологического раствора и этанола в дозе 1г/кг в диэструсе. Однако при инъекции этанола в дозе 4 г/кг наблюдается достоверная зависимость активности КПН от времени в гипофизе и гипоталамусе. При этом этанол в дозе 4г/кг вызывал в гипофизе U-образное изменение активности фермента, а в гипоталамусе активность фермента плавно снижалась с течением времени.
Таблица 2. Дисперсионный анализ влияние времени на активность карбоксипептидазы Н в диэструсе (значения отношения Фишера FФ и баллы экспериментальных (временных) подгрупп).
| Отдел | Воздействие | Fф | Норма | Временные подгруппы | ||
| 0,5 ч. | 4 ч. | 18 ч. | ||||
| Гипофиз | Физраствор | 3,45* | 1 | 1 | 1 | 1 |
| Этанол 1г/кг | 2,87 | - | - | - | - | |
| Этанол 4 г/кг | 7,03** | 1,5 | 2,5 | 1 | 3 | |
| Гипоталамус | Физраствор | 2,57 | - | - | - | - |
| Этанол 1г/кг | 2,09 | - | - | - | - | |
| Этанол 4 г/кг | 4,03* | 1,5 | 2 | 1,5 | 1 | |
| Стриатум | Физраствор | 0,90 | - | - | - | - |
| Этанол 1г/кг | 0,93 | - | - | - | - | |
| Этанол 4 г/кг | 1,05 | - | - | - | - | |
| Надпочечники | Физраствор | 0,56 | - | - | - | - |
| Этанол 1г/кг | 0,52 | - | - | - | - | |
| Этанол 4 г/кг | 0,26 | - | - | - | - | |
| Яичники | Физраствор | 0,62 | - | - | - | - |
| Этанол 1г/кг | 0,33 | - | - | - | - | |
| Этанол 4 г/кг | 2,79 | - | - | - | - | |
Примечание. Здесь и в табл.3-4, 6-8, 10-12, 14, 16, 18, 19 показана достоверность критерия Фишера: * - p<0,05, ** - p<0,01, *** - p<0,001; прочерк - определение не проводилось.
На стадии проэструса активность КПН при введении этилового спирта (доза 1г на кг массы тела) в гипофизе через все исследованные промежутки времени была ниже контрольных значений: на 45% через 0,5 часа и на 24% через 4 часа. В других отделах этанол в дозе 1г/кг не изменял активность КПН относительно контроля.
В дозе 4г/кг в проэструсе этанол вызывал снижение активности в гипофизе через 0,5 часа и в надпочечниках через 4 часа на 32% и 48% соответственно по сравнению с контрольной группой крыс. В яичниках через
4 часа после инъекции этанола активность фермента составляла 174% по отношению к контрольной группе.
На стадии проэструса достоверное влияние различных доз этанола обнаружено в надпочечниках и яичниках через 4 часа после оказанного воздействия: этанол в дозе 1 г/кг не изменял активность КПН по сравнению с контролем, однако в дозе 4 г/кг в надпочечниках уменьшал, а в яичниках увеличивал активность фермента.
Следует отметить, что в проэструсе введение этанола в дозе 1 г/кг и 4 г/кг не влияло на активность КПН в гипоталамусе и стриатуме через все исследованные промежутки времени.
Согласно результатам дисперсионного анализа активность КПН в проэструсе не зависела от времени. Однако в гипофизе инъекция физраствора или этанола приводила к снижению активности фермента через 0,5 и 4 часа по сравнению с нормой (табл.3).
В стадии эструса этанол в дозе 1 г/кг через 0,5 часа после инъекции увеличивал активность КПН во всех исследованных органах, кроме яичников: в гипофизе на 162%, в гипоталамусе на 39%, в стриатуме на 29% и в надпочечниках на 106% по сравнению с контрольной группой животных. В гипофизе активность КПН повышалась и через другие исследованные промежутки времени: через 4 и 18 часов на 92% и 30% соответственно по отношению к контролю. В то же время в стриатуме через 4 часа после внутрибрюшинного введения этилового спирта в дозе 1 г/кг активность фермента относительно контрольной группы уменьшилась на 19%. В надпочечниках через 18 часов после инъекции этанола в дозе 1 г/кг активность КПН была выше на 44%, чем в контрольной группе животных.
На стадии эструса через 0,5 и 18 часов после введении этанола в дозе 4 г/кг ни в одном органе активность фермента не отличалась от контрольных
Таблица 3. Дисперсионный анализ влияние времени на активность карбоксипептидазы Н в проэструсе (значения отношения Фишера FФ и баллы экспериментальных (временных) подгрупп).
| Отдел | Воздействие | Fф | Норма | Временные подгруппы | |
| 0,5 ч. | 4 ч. | ||||
| Гипофиз | Физраствор | 10,88*** | 2 | 1 | 1 |
| Этанол 1г/кг | 17,14*** | 2 | 1 | 1 | |
| Этанол 4 г/кг | 12,71*** | 2 | 1 | 1 | |
| Гипоталамус | Физраствор | 1,12 | - | - | - |
| Этанол 1г/кг | 0,36 | - | - | - | |
| Этанол 4 г/кг | 1,07 | - | - | - | |
| Стриатум | Физраствор | 1,10 | - | - | - |
| Этанол 1г/кг | 0,12 | - | - | - | |
| Этанол 4 г/кг | 0,97 | - | - | - | |
| Надпочечники | Физраствор | 3,80* | 1 | 1 | 1 |
| Этанол 1г/кг | 0,94 | - | - | - | |
| Этанол 4 г/кг | 3,63 | - | - | - | |
| Яичники | Физраствор | 1,55 | - | - | - |
| Этанол 1г/кг | 2,71 | - | - | - | |
| Этанол 4 г/кг | 1,66 | - | - | - | |
величин, кроме яичников, где через 18 часов после воздействия активность КПН уменьшилась в 2,6 раза. В гипоталамусе и стриатуме через 4 часа после воздействия этанола в дозе 4 г/кг активность фермента была ниже на 24% и 52% соответственно по отношению к контрольным самкам.
Статистически значимые отличия во влиянии разных доз этанола на активность КПН на стадии эструса обнаружены в гипофизе через 0,5 часа, в гипофизе, гипоталамусе и стриатуме через 4 часа, а также в надпочечниках и яичниках через 18 часов после внутрибрюшинной инъекции алкоголя. При этом этанол в дозе 1 г/кг повышал активность КПН в гипофизе и надпочечниках, но не влиял на активность в дозе 4 г/кг по сравнению с контролем. В гипоталамусе и яичниках меньшая доза алкоголя не вызывала изменений, а большая приводила к снижению активности КПН. В стриатуме при введении этанола в дозе 4 г/кг активность фермента была ниже, чем при введении этанола в дозе 1 г/кг по сравнению с контрольной группой животных. Различия во влиянии двух доз этанола, возможно, связаны со спецификой действия больших и малых доз этанола [19].