С целью определения времени действия антибиотиков на микрофлору использовали в эксперименте модель, которая состояла из среды Дюльбекко, антибактериальных средств и чистых культур микроорганизмов. В качестве антибактериальных средств использовали комбинации антибиотиков в ранее испытанных концентрациях: гентамицин (12 мкг/мл) с ампициллином (100 Ед/мл); пенициллин (100 Ед/мл) со стрептомицином (50 Ед/мл). Действие антибиотиков испытывали на ассоциации чистых культур микроорганизмов, ранее выделенных из половых путей доноров и реципиентов влютеальную фазу полового цикла: Е. coli, Ps. aeruginosa, Вас.subtilis, Staph. aureus). После моделирования через каждые 15 минут производили высевы на питательные среды.
Таблица 3. Сравнительная оценка многократного отмывания эмбрионов средами с добавлением антибиотиков и без них
| Среды для отмывки эмбрионов | Всего исследовано сред | Рост микрофлоры на питательных средах (МПБ, МПА) | |
| Количество | % | ||
| Гентамицин + ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл) (опыт) | 25 | 0 | 0 |
| Без антибиотиков (контроль) | 25 | 3 | 12±6,49 |
Опытная модель подвергалась воздействию комплекса антибиотиков гентамицин+ампициллин, контролем служили пробы с антибиотиками пенициллин+стрептомицин и без добавления антибиотиков.
Микробиологические исследования показали, что 15 минутное воздействие комплекса антибиотиков гентамицин+ампициллин убивает ассоциации вышеуказанных микроорганизмов (табл. 4).
Таблица 4. Влияние антибиотиков на микрофлору в промывных буферных средах
| Антибиотики, добавленные в среду Дюльбекко | Экспозици (мин.) | Рост микрофлоры на питательных средах | ||
| МПБ | МПА | МПА в чашках (кол-во колоний) | ||
| Гентамицин + ампициллинПенициллин + стрептомицинБез антибиотиков | 15 | -++ | --+ | 0520 |
| Гентамицин + ампициллинПенициллин + стрептомицинБез антибиотиков | 30 | --+ | --+ | 0047 |
| Гентамицин + ампициллинПенициллин + стрептомицинБез антибиотиков | 60 | --+ | --+ | 0059 |
| Гентамицин + ампициллинПенициллин + стрептомицинБез антибиотиков | 90 | --+ | --+ | 00100 |
Примечание: Вышеуказанные антибиотики в концентрациях: гентамицин 12 мкг/мл + ампициллин 100 Ед/мл, пенициллин 100 Ед/мл + стрептомицин 50 Ед/мл. (+) – рост микроорганизмов, (–) – отсутствие роста микроорганизмов
Таблица 5. Влияние антибиотиков на развитие эмбрионов
| №п/п | Среда для культивирования эмбрионов | Стадия развития | Всего эмбрионов, шт. | Стадия развития эмбрионов через 24 часа | Количество развившихся эмбрионов | ||||||||
| МП | БР | БП | БР | % | БП | % | БЭ | % | Шт. | % | |||
| 1 | Без антибиотиков (контроль) | 7 | 5 | 7 | 19 | 5 | 71,4 | 5 | 100 | 5 | 71,4 | 15 | 78,95 |
| 2 | С комплексом антибиотиков: Гентамицин + ампициллин (12 мкг/мл и 10 ЕД/мл) | 9 | 5 | 7 | 21 | 5 | 55,5 | 5 | 100 | 5 | 71,4 | 15 | 71,43 |
| 3 | С комплексом антибиотиков: Пенициллин + стрептомицин (100 и 50 ЕД/мл) | 6 | 5 | 4 | 15 | 3 | 50 | 2 | 40 | 3 | 75 | 8 | 53,33 |
Существенным качественным параметром развития эмбриона в культуре является образование бластоцеля. В опыте, где была использована среда с добавлением комплекса антибиотиков гентамицин+ампициллин в концентрациях 12 мкг/мл и 100 Ед/мл, в контроле – среда с антибиотиками пенициллин+стептомицин (100 и 50 Ед/мл), во втором контроле – среда без добавления антибиотиков: 5 из 7 (71,4%), 5 из 9 (55,5%) и 3 из 6 (50%) эмбрионов развились из стадии морулы поздней (МП) в бластоцисту раннюю (БР); 5 из 5 (100%), 5 из 5 (100%), 2 из 5 (40%) эмбрионов развились из стадии бластоцисты ранней (БР) в бластоцисту позднюю (БП); 5 из 7 (71,4%), 5 из 7 (71,4%) и 3 из 4 (75%) эмбрионов развились из стадии бластоцисты поздней (БП) в стадию бластоцисты экспандированной (БЭ), соответственно (табл. 5).
Полученные данные свидетельствуют о том, что контакт эмбрионов в течение 2-х часов в среде с комплексом антибиотиков гентамицин + ампициллин в концентрациях 12 мг/мл и 100 Ед/мл, соответственно, не оказывает на их дальнейшее развитие более существенного влияния, чем комплекс антибиотиков пенициллин + стрептомицин в общепринятых концентрациях (100 и 50 Ед/мл). Учитывая большую бактерицидную активность предложенного комплекса антибиотиков по сравнению с комплексом пенициллин + стрептомицин можно считать целесообразным его использование для санации промывных буферных сред и эмбрионов в практике эмбриотрансплантации.
С целью определения влияния комплекса антибиотиков гентамицин + ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл) на приживляемость эмбрионов проведены опыты по пересадке их реципиентам. При подготовке эмбрионов к пересадке мы проводили последовательное отмывание их в пяти чашках буферными средами, содержащими вышеуказанный комплекс антибиотиков. Контролем служили эмбрионы, отмытые средами, не содержащими антибиотиков.
Отмытые опытные и контрольные эмбрионы пересаживали телкам-реципиентам. Стельность определяли по результатам ректальных исследований.
Данные по влиянию антибиотиков на приживляемость эмбрионов приведены в таблице 6.
Таблица 6. Влияние антибиотиков на приживляемость эмбрионов
| Среды для отмывки эмбрионов | Всего исследовано реципиентов | Из них стельные | |
| Количество | % | ||
| Гентамицин + ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл) (опыт) | 28 | 21 | 75 |
| Без антибиотиков (контроль) | 32 | 16 | 50 |
Данные таблицы 6 свидетельствуют о том, что из 28 реципиентов, которым были пересажены эмбрионы, отмытые в средах с комплексом антибиотиков гентамицин+ампициллин (12 мкг/мл и 100 Ед/мл), стельными стали 21 голова, что составило 75%, в контроле из 32 реципиентов только 16 голов оказались стельными или 50%.
Таким образом, комплекс антибиотиков гентамицин+ампициллин не только дает хороший антимикробный эффект, но и повышает приживляемость эмбрионов за счет того, что в матку реципиента вместе с пересадочным материалом (эмбрионами) вводилось небольшое количество среды с антибиотиками, которые создавали асептические условия в конкретном участке матки. Поэтому мы рекомендуем всем пунктам трансплантации добавлять указанный комплекс антибиотиков в среды для отмывки эмбрионов.
Экономический ущерб от снижения молочной продуктивности:
У2к =7*13,1*60*0,73=1049,38 грн.
У2оп.=16*13,1*60*0,73=9180,48
Экономический ущерб от недополучения приплода:
У5= Кр (Рв – Рф) * Сп, где
Кр – коэффициент рождаемости
Рв – планировалось отелится
Рф – фактический отел
Сп – стоимость теленка при рождении
У5к = 0,5*(28–21)*263,53=922,3 грн.
У5оп = 0,5* (32–16)*263,53=2108,24 грн.
Уфк = У2 – У5 = 12971,74 грн.
Уф оп = 9180,48+2108,24=11288,72 грн.
Предотвращенный экономический ущерб при трансплантации эмбрионов
Пу = М0 * Кз * Кп * Ц – Уф
М0 – количество восприимчивого поголовья
К3 – коэффициент заболеваемости
Кп - удельная величина потерь основной продукции в расчете на 1 заболевшее животное
Пу (к) = 160*0,375*617,7*0,73–12971,74=14083,52
Пу (оп) = 160*0,375*705,55*0,73–11288,72=19614,37
Зв (к) = 152,3*32=4873,6
Зв (оп) = 157,6*28=4412,8
Эв = Пу – Зв
Эв (к) = 14083,52
Эв (оп) = 19614,37–4412,8=15201,57
Экономический эффект на 1 грн. ветеринарных затрат
Эгрн = Эв / Зв
Эгрн = 9209,92/4873,6=1,89
Эгрн = 15201,57/4412,8=3,44
Вывод: экономическая эффективность ветеринарных мероприятий на 1 гривну ветеринарных затрат составила в контрольной группе 1,89 грн, а в опытной – 3,44 грн, что оправдывает проведение данных мероприятий.
Как известно, низкий уровень воспроизводства у самок и длительный интервал времени между поколениями, в среднем 6-7 лет у крупного рогатого скота, ограничивают генетический прогресс в животноводстве. В настоящее время эта проблема решается в значительной степени за счет внедрения новых более радикальных методов разведения животных, в частности метода трансплантации эмбрионов. Значительным недочетом существующей технологии трансплантации является то, что она не предусматривает специальных мероприятий, повышающих приживляемость эмбрионов. Основной задачей нехирургической эмбриотрансплантации является повышение приживляемости эмбрионов, зависящей от многих факторов, одним из которых является асептичность всех проводимых операций.
На приживляемость эмбрионов оказывает влияние много причин. В своей работе мы изучали только влияние микробного фактора на приживляемость эмбрионов. Из литературных данных известно, что в процессе эволюции у животных сложились мощные иммунные барьеры, препятствующие инфицированию половых путей микрофлорой. Основными факторами, обеспечивающими защиту половых путей коров и телок являются барьерные функции слизистых оболочек, особенно шейки матки. Так, цервикальная слизь во время течки и охоты обладает бактерицидным действием (В.П. Полищук, 1984; В.С. Шипилов, 1988). Другие исследователи сообщают, что даже во время течки и половой охоты у многих коров в пробах слизи из шейки матки были обнаружены различные бактерии (M. Krisha et al., 1974).