Для количественного измерения иммуноглобулинов в сыворотке крови (Ig G, Ig A, Ig M) используется метод радиальной иммунодиффузии. Он также позволяет определять субклассы Ig G.
На основе моноклональных и поликлональных антител разработаны и другие методы определения иммуноглобулинов: рокетный иммуноэлектрофорез, ИФА, турбидометрия, нефелометрия.
Уровни сывороточных иммуноглобулинов, характерные для взрослых (Ig M, Ig G1, Ig G3), достигают нормальных значений уже в раннем постнатальном периоде; уровень Ig G2, Ig G4, Ig A не достигает нормальных цифр даже в период полового созревания.
Распределение субклассов Ig G в сыворотке крови взрослого человека следующее:
- Ig G1 - 60-65%;
- Ig G2 - 20-25%;
- Ig G3 - 10-20%;
- Ig G4 - 10-20%.
Наиболее часто у больных имеется ассоциация дефицитов Ig G2,Ig G4, Ig A, Ig E.
Определение уровня субклассов Ig G существенно при повышенной чувствительности к бактериальным инфекциям; дефициты установлены практически для всех иммуноглобулинов, наиболее существенным среди которых является дефицит Ig G2; часто дефицит Ig G2
сочетается с полным отсутствием Ig A.
Определение основных классов иммуноглобулинов в сыворотке (Ig G, Ig A, Ig M) является полезным тестом для оценки дефицитов иммуноглобулинов. Измерение субклассов Ig A не является существенным ни при каком клиническом состоянии, но полезно в
научно-исследовательских целях.
Определение общего уровня Ig E существенно для диагностики синдрома гипер-Ig E, полезно для дифференциальной диагностики атопических заболеваний наряду с Ig G4; высокий уровень Ig E в пуповинной крови может быть полезен как индикатор высокого
риска атопических заболеваний;
Измерение уровней специфического Ig E- или Ig G4-антител полезно при таких состояниях, как пищевая аллергия у детей, гиперчувствительность к яду насекомых и т.д. Однако, часто уровень сывороточного Ig E не коррелирует с наличием аллергического
процесса.
Определение сывороточных аутоантител, особенно антинуклеарных, печеночных аутоантител и аутоантител, ассоциированных с эндокринными расстройствами, производится с помощью следующих методов: ИФА, радиоиммуноанализ, иммунодиффузия, встречный
иммуноэлектрофорез, иммуноблот.
Проблемы интерпретации результатов могут быть вызваны наличием гетерофильных антител, неспецифическим связыванием иммуноглобулинов, наличием аутоантител у здоровых лиц. Ложнонегативные результаты могут быть получены в случае ремиссии
заболевания, иммунодепрессивной терапии и большой потери иммуноглобулинов.
И м м у н о ф е н о т и п и р о в а н и е к л е т о к
Подсчет Т- и В-клеток является существенным для диагностики первичных и вторичных иммунодефицитов и определения природы этого иммунодефицита, при идентификации аномальных (лейкозных) клеток. При лимфопролиферативных заболеваниях
иммунофенотипирование является полезным для классификации субтипов острого лимфобластного лейкоза у детей.
Иммунофенотипирование полезно для диагностики острых неидентифицированных лейкозов и популяций злокачественных клеток в периферической крови.
При аутоиммунных заболеваниях и раке негемопоэтической природы иммунофенотипирование имеет значение лишь в научно-исследовательских целях и почти не дает полезной диагностической или практической информации. (см. прил. табл. 1.1).
И м м у н н ы е к о м п л е к с ы
Их обнаружение ни при одном из клинических состояний не является существенным. Обнаружение ЦИК полезно при оценке и мониторинге активности аутоиммунных заболеваний (РА, СКВ). Более существенно для оценки патологических состояний определение
иммунных комплексов, фиксированных в тканях, сосудах.
Л е й к о т р и е н ы и п р о с т а г л а н д и н ы
Эти молекулы высвобождаются активированными макрофагами и гранулоцитами и играют важную роль в воспалительных процессах.
Определение их в крови и тканевых жидкостях возможно с помощью радиоиммунотеста. В будущем их определение может оказаться существенным при многих заболеваниях; но на сегодня они пока находят малое клиническое применение, хотя полезны в
научно-исследовательских целях.
Ц и т о к и н ы
Цитокины насчитывают огромное число регуляторных молекул: интерлейкины, факторы некроза опухолей, интерфероны.
Синтез цитокинов осуществляется макрофагами и лимфоцитами в ходе иммунного ответа.Некоторые цитокины синтезируются другими типами клеток.
Измерение этих молекул производят высокочувствительными радиоиммунологическими методами в биологических жидкостях. Существенным является их определение у больных с соответствующим врожденным иммунодефицитом (ИЛ-1).
В настоящее время эти тесты полезны только в научно-исследовательских целях, хотя в будущем они станут более важными для определения новых нозологических форм и терапии (интерлейкинзависимая иммунопатология).
О ц е н к а ф у н к ц и и л и м ф о ц и т о в
(пролиферативная, иммунорегуляторная, цитотоксическая и т.п.)
Эта оценка существенна при обследовании больных с подозрением на первичный иммунодефицит, полезна при обследовании больных со вторичными иммунодефицитами, целесообразна при заболеваниях, когда затрагиваются иммунные механизмы и с
научно-исследовательскими целями.
О ц е н к а ф у н к ц и и ф а г о ц и т а р н ы х
к л е т о к
(моноцитарно-макрофагальные клетки, нейтрофилы)
Адгезивную способность нейтрофилов можно измерить по прилипанию к волокнам из нейлона.
Миграцию и хемотаксис фагоцитирующих клеток можно оценить при использовании агарозных тестов; поглотительную способность лейкоцитов измеряют по захвату ими различных частиц (микроорганизмы, частицы латекса); метаболическая активность клеток после
поглощения может быть оценена в тесте с нитросиним тетразолием (НСТ-тест) или хемилюменисценцией.
Бактерицидная активность фагоцитов основана на подсчете жизнеспособных бактерий, оставшихся внутри клеток после инкубации. Оценка функции фагоцитов существенна при обследовании больных с подозрением на первичный иммунодефицит, полезна при диагностике
вторичных иммунодефицитов и в научно-исследовательских целях.
К о м п л е м е н т
Тесты по определению комплемента подразделяются на два типа:
1) определение общей гемолитической активности;
2) определение активности отдельных компонентов.
Оценка функциональных свойств комплемента существенна у больных с подозрением на врожденный дефицит комплемента; полезна при ведении больных с различными иммунными расстройствами, мониторинге эффекта лечения (РА, СКВ).
1.1 О ц е н к а и м м у н о г р а м м ы.
Полученные в ходе иммунологического исследования показатели регистрируются. Совокупность цифровых показателей, отражающих состояние отдельных звеньев иммунной системы человека, составляет ИММУНОГРАММУ. Единой формы иммунограммы нет.
Эта форма произвольна, однако она должна включать основные показатели.
Можно привести следующий вид бланка иммунограммы:
Ф.И.О._____________дата_____________
возраст______________________________
диагноз______________________________
-----------T--------------T------------T-------------
Показатель ¦ Содержание у ¦ Показатель ¦ Содержание у
¦ больного ¦ ¦ больного
-----------+--------------+------------+-------------
лейкоциты ¦ ¦ В-клетки ¦
лимфоциты ¦ ¦ Ig A ¦
(%) ¦ ¦ Ig M ¦
абс.ч. ¦ ¦ Ig G ¦
Т-клетки ¦ ¦ Ig E ¦
(ТФР-РОК ¦ ¦ ЦИК ¦
ТФЧ-РОК) ¦ ¦ фагоцитоз ¦
CD4 ¦ ¦ комплемент ¦
CD8 ¦ ¦ ¦
иммунорегу-¦ ¦ дополни- ¦
ляторный ¦ ¦ тельные ис-¦
индекс(ИРИ)¦ ¦ следования ¦
Врач иммунолог-лаборант
КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКОЕ ЗАКЛЮЧЕНИЕ
_____________________________________________________
_____________________________________________________
_____________________________________________________
Врач-иммунолог
К а к о ц е н и т ь и м м у н о г р а м м у?
Ответ на этот вопрос является наиболее существенным в работе практического иммунолога и не может на сегодняшний день быть однозначным.
Эволюция взглядов и подходов к оценке иммунограммы происходила в соответствии с накоплением фактических данных о механизмах функционирования иммунной системы.
С этих позиций предложено выделять несколько ее этапов (Ковальчук Л.В., Чередеев А.Н., 1991):
Э л е м е н т а р н ы й (1940-1970 гг.) - представления об иммунитете как о противоинфекционной защите.
Основные тесты :
- определение фагоцитарной активности нейтрофилов;
- БАС;
- лизоцим и т.д.
Э м п и р и ч е с к и й (1970-1990 гг.) - период создания учения о структурном и функциональном единстве иммунной системы и ее роли как одной из регулирующих гомеостаз (наряду с ЦНС и эндокринной).
В этот период сформировалась и была внедрена в практику указанная выше двухэтапная система оценки иммунного статуса человека. На основании указанных методов можно ориентировочно определить вид иммунного статуса.
Но далеко не всегда такой эмпирический подход позволяет с полной уверенностью расценить полученные данные иммунограммы как тот или иной вид иммунопатологии.
Отрицательные стороны эмпирического подхода к оценке иммунограммы:
1) не учитывается наличие скрытой и сопутствующей патологии;
2) не учитывается экологическая обстановка, в которой живет человек.
Чтобы уменьшить вероятность ошибки при эмпирическом подходе к оценке иммунного статуса, было введено понятие об адаптивных и базисных показателях иммунограммы, как поправка на экологически вредное воздействие на человека (Петров Р.В., Михайленко
А.Н., 1991).
Адаптивные - это показатели, отражающие наличие экзогенного воздействия на организм, и их отклонения от среднего уровня у клинически здорового человека свидетельствуют об адекватности его здоровья этому внешнему воздействию.
К адаптивным показателям относятся уровень сывороточных иммуноглобулинов (Ig M, Ig G) и содержание Т-лимфоцитов в периферической крови.
Базисные - это показатели, тесно связанные с нарушением состояния здоровья. Изменения базисных показателей у клинически здорового человека свидетельствуют о скрытом развитии заболевания, т.е. о нарушениях эндогенного характера и неадекватности