ти и огромной разрешающей способности. Загрязнение материала
особенно опасно в тех случаях, когда прогноз дается на осно-
ве анализа амплифицированных фрагментов ДНК. Попавшие в тес-
тируемые образцы клетки чужеродного происхождения могут пос-
лужить источником донорской ДНК для ПЦР и тогда может быть
получено несоответствующее действительности заключение о
том, что ребенок будет здоров. Риск подобных ошибок может
быть значительно уменьшен при работе в стерильных условиях и
при постановке анализов в нескольких параллельных пробах.
Конечно, в любом диагностическом центре возможны лаборатор-
ные ошибки чисто технического порядка, не зависящие от ис-
пользуемых методов тестирования. Однако, достоверность прог-
нозирования, основанного на прямом анализе мутантных аллелей
плода, обычно, превышает 99%. При использовании косвенных
методов молекулярной диагностики появляется дополнительный
риск ошибки, связанный с возможностью рекомбинации между му-
тантным аллелем и маркерным локусом (особенно при больших
размерах гена, как, например, в случае гена дистрофина).
Конкретное значение этого риска зависит от взаимного распо-
ложения используемых для диагностики маркеров и соответству-
ющих мутантных аллелей. Обычно, для молекулярной диагностики
используют маркеры, частота рекомбинации которых с мутантны-
ми аллелями гена не превышает десятых, а иногда и сотых до-
лей процента.
В случае неблагоприятного прогноза в отношении здоровья
будущего ребенка решение о прерывании или продолжении бере-
менности принимают родители на основании предоставленного в
их распоряжение общего заключения. После рождения ребенка
или прерывания беременности желательно проводить верификацию
диагноза всеми доступными для этого методами, включая и те,
которые были использованы для постановки пренатального диаг-
ноза.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
При всем разнообразии тем, затронутых в монографии,
весь изложенный в ней материал, по-сути, касается трех
основных проблем : 4(1) 0генетическое картирование и геном че-
ловека, 4(2) 0молекулярная диагностика генных болезней, 4(3)
генокоррекция наследственных дефектов и генотерапия. В реше-
нии каждой из названных проблем достигнуты серьезные успехи.
Напомним некотрые из них.
Известно, что первый ген человека (ген цветной слепо-
ты-дальтонизма) картирован на Х-хромосоме человека в
1911г. Первый аутосомный ген - только в 1968г. К 1973 на
всех хромосомах человека было картировано всего 64 гена, а к
1994г. на генетических картах уже локализовано свыше 60 000
маркерных ДНК последовательностей (главным образом, фрагмен-
тов кДНК экспрессирующихся генов-EST см.Главу III.), а также
4более 05 000 полноразмерных структурных генов. Благодаря мно-
гочисленным полиморфным сайтам и, главным образом, микроса-
теллитным молекулярным маркерам, созданы подробные (1,5-2
сантиморганные) генетические карты для каждой хромосомы че-
ловека. Это позволило перейти от функционального к позицион-
ному картированию, т 4о 0е 4сть 0картированию новых генов не-
посредственно на физической карте ДНК целого генома.
По мнению авторитетных специалистов по генетическому
картированию таких как Питер Гудфеллоу, Поль Вайссенбах и
др 4угих, 0дальнейшее наращивание плотности молекулярных марке-
ров на хромосомах человека уже лишено смысла, тем более, что
в процессе идетификации все новых и новых генов методом EST,
новые полиморфные сайты все равно будут найдены. Не менее
оптимистично обстоят дела и с секвенированием, т 4о 0е 4сть 0вы-
яснением первичной нуклеотидной последовательности всей
двухметровой молекулы ДНК человека. Достаточно заметить, что
первоначальная стоимость секвенирования одной пары нуклеоти-
дов оценивалась в 1 $, сейчас она составляет уже около 40
центов и продолжает снижается. Причина этого - широкая авто-
матизации монотонного процесса секвенирования. Так, 10 робо-
тов фирмы Applied Biosystems за одну неделю секвенируют бо-
лее 30 000 000 п 4ар 0о 4снований. 0Дальнейшее совершенствование
технологии секвенирования 4, 0создани 4е 0принципиально новых под-
ходов (метод "чипов"-Мирзабеков А.Д., Ed.Southern ),
4повышающих в десятки раз 0степен 4ь 0автоматизации этого про-
цесса в высокоспециализированных центрах позволяет наде-
яться, что секвенирование всего генома человека будет завер-
шено в 2 006 году, а вполне вероятно и к 2 000 году!
Однако, само по себе завершение гигантского по замыслу и
грандиозного по реализации научного проекта "Геном человека"
отнюдь не означает, что процесс познания генома завершен.
Уже сейчас становится очевидным, что не существует какого-то
усредненного генома человека, каждый геном как и каждый че-
ловек сугубо индивидуален. Эта индивидуальность генома про-
является не только на уровне отдельной личности, но и на
уровне этнических групп, наций, отдельных популяций и рас
(Cavalli-Sforsa,1994). Геном человека как система динамич-
ная, очень разнообразен. Анализ этого разнообразия
(diversity) - одно из важнейших продолжений программы Геном
человека. Еще более актуальным является выяснение "функцио-
нальной карты генома". Секвенирование позволит расшифровать
порядок всех 3 4.5 0х 10 4! 09 нуклеотидов. Но ведь это только на-
чало. Определить границы генов, выяснить положение много-
численных регуляторных элементов, их интронно-экзонную
структуру и, наконец, функциональное назначение каждого из
60 000 генов, назначение которых пока неизвестно - вот сле-
дующая поистине глобальная задача молекулярной генетики.
Вполне вероятно, что именно на этом пути удастся решить за-
гадку "избыточной ДНК", понять эволюцию (филогенез) генома
человека и ,возможно, расшифровать партитуру симфонии жизни
- т 4о 0е 4сть 0последовательность включения и выключения генов в
ходе онтогенеза.
На генетические карты человека уже в 1994г. нанесено
933 гена, мутации которых приводят к различным наследствен-
ным заболеваниям, причем более 400 из них проклонированы,
т 4о 0е 4сть 0выделены в чистом виде и размножены вне оргаизма че-
ловека в составе ДНК фагов, вирусов, дрожжей и бактерий. Для
многих из этих генов, в особенности, сопряженных с наиболее
частыми, социально значимыми заболеваниями, подробно изучены
спектры мутаций, охарактеризованы аллельные полиморфизмы и
разработаны схемы молекулярной диагностики. Причем, если в
1993г. таких заболеваний было около 130 (Bob Williamson), то
в 1994 - более 600. По-сути, уже сегодня каждый наследствен-
ный недуг, ген которого картирован, доступен молекуярной ди-
агностике прямыми или косвенными методами.
Помимо моногенных болезней, проблемы молекулярной диаг-
ностики которых в значительной степени уже решены, все боль-
ше внимания сегодня уделяют мультифакториальным заболевани-
ям. На повестке дня молекулярная диагностика предрасположен-
ности к таким широкораспространенным недугам как атероскле-
роз, ишемия сердца, онкологические 4, психиатрические 0заболе-
вания, диабет и мн 4огое 0друг 4о 0е. Выяснение генетической приро-
ды этих болезней, равно как досимптоматическая диагностика
многих моногенных болезней с поздней манифестацией, ставит
перед исследователями 4, 0т 4о 0е 4сть 0молекулярными биологами и
врачами 4, 0проблему целесообразности такой досимптоматической
диагностики, права личности на исключительность знаний о
собственном геноме, точнее о тех мутациях и генетических
предрасположенностях которые закодированы в нем еще до рож-
дения. Для некоторых заболеваний 4( 0муковисцидоз, фенилкетону-
рия) такая ранняя диагностика, безусловно, целесообразна,
так как позволяет начать лечение до начала заболевания. Для
тех же нозологий, где реальной терапии пока нет (хорея Ген-
тингтона, другие болезни "экспансии", миодистрофия Дюшенна и
др.) целесообразность такой диагностики и, главное, конфи-
денциальность полученной информации широко обсуждаются.
Да, уже сейчас вполне реально говорить о "генетическом
паспорте новорожденных", т 4о 0е 4сть 0о том, что уже вскоре после
рождения с помощью автоматизированной системы удасться проа-
нализировать весь спектр наиболее частых мутаций широко
распространенных заболеваний как моногенной так и мультифак-
ториальной природы 4, в 0том числе и генов, мутации которых с
высокой вероятностью могут привести к раку молочной железы,
толстого кошечника, к атеросклерозу, диабету и мн 4огим 0другим
ттяжелым недугам. Жить 4, 0н 4и 0в чем себя не ограничивая, засу-
нув как страус голову в песок, либо, зная, что у вас мутация
в гене глутатионтранферазы, а следовательно, высока вероят-
ность болезней легких (особенно рака) воздержаться от куре-
ния ? Что лучше, добровольные ограничения и периодические
осмотры или состояние счастливого неведения, грозящее неми-
нуемой катастрофой ? А сколько мультифиакториальных заболе-
ваний можно избежать, зная о слабых и сильных сторонах свое-
го генома! В настоящее время в США провдятся массовые опросы
населения, цель которых выяснить целесообразность досимпто-
матической диагностики в семьях высокого риска, доступность
(конфиденциальность) этой информации для членов семьи, нани-
мателей, страховых компаний и пр. Иными словами, практически
овладев плодом Древа Познания - собственным геномом- челове-
чество поставлено перед дилеммой как сделать так, чтобы
польза от него оказалась много весомее, чем потенциальный
вред. Неслучайно, сегодня уже на новом, молекулярном уровне